Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences

بررسی اثر سینرژیسمی بیوسورفکتانت تولیدی توسط رودوتورولا با داروهای ضد قارچی بر ایزوله های کاندیدا آلبیکنس Evaluation of synergistic effect biosurfactant produced by Rhodotorula with antifungal drugs against Candida albicans

حلوائی زاده, مرضیه (2016) بررسی اثر سینرژیسمی بیوسورفکتانت تولیدی توسط رودوتورولا با داروهای ضد قارچی بر ایزوله های کاندیدا آلبیکنس Evaluation of synergistic effect biosurfactant produced by Rhodotorula with antifungal drugs against Candida albicans. Masters thesis, دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran,School of Medicine دانشکده پزشکی

[img]
Preview
Text
m113075.pdf.pdf

Download (1MB) | Preview

Abstract

مقدمه: بیوسورفکتانت ها ترکیباتی طبیعی و محصولات تولیدی توسط میکروارگانیسم ها می باشند که در طی سال های اخیر موارد استفاده زیادی در صنعت، پزشکی و پروژه های زیست محیطی داشته اند. دو شاخص مهم بیوسورفکتانت ها که مورد توجه بسیاری از پژوهشگران و محققان قرار گرفته است، سمیت کم و پذیرش زیست محیطی این ترکیبات می باشند. با وجودی که بیشترین مقدار بیوسورفکتانت تولید شده به باکتری ها تعلق می گیرد، بعضی از مطالعات جدید حاکی از آن است که رودوتورولا موسیلیژینوزا و کاندیدا روگوزا نیز می توانند منابع جدیدی برای تولید بیوسورفکتانت باشند. هدف: بررسی خاصیت ضد قارچی بیوسورفکتانت بدست آمده از رودوتورولا در ترکیب با داروهای ضد قارچ (آمفوتریسین ب، فلوکونازول، کاسپوفانژین، ایتراکونازول، میکونازول، وریکونازول، پوساکونازول و تربینافین) علیه ایزوله های کاندیدای جدا شده از چند منبع مختلف. مواد و روشها: در مطالعه حاضر گونه رودوتورولا پالودیجنا برای تولید بیوسورفکتانت انتخاب شد و تولید محصول با استفاده از چندین تست مختلف مانند تست انتشار نفت خام، انهدام قطره و فعالیت همولیزین تایید شد. بیوسورفکتانت پس از کشت دادن مخمر در محیط سابورودکستروز براث و انکوباسیون به مدت 7-5 روز تولید گردید. سپس با عمل سانتریفیوژ مایع رویی از رسوب مخمرها جدا سازی و با کمک کلروفرم – متانول بیوسورفکتانت استخراج گریدید. بیو سورفکتانت خام به مدت یک شب در یخچال 4 سانتی گراد نگهداری شد. پس از آن باقیمانده کلروفرم متانول خارج شد و بیوسورفکتانت خشک در فریزر 20- تا موقع استفاده نگهداری شد. رقت ها ی سریالی از بیوسورفکتانت و داروهای آنتی فونگال در RPMI 1640 محتوی 01/0 رنگ رزاسورین تهیه شد. برای ارزیابی اثرات ترکیبی بیوسورفکتانت و آنتی فونگال از متد چیکربرد استفاده شد. غلظت ممانعت کننده کسری یا FIC برای هر مخمر محاسبه و سپس ΣFIC بدست آمد. در صورتی که FIC≤ 0.05∑ باشد اثر متقابل ترکیبات سینرژیستی، 5/0-1 افزایشی، 4-1 بدون اثر و در صورتی که FIC≥4∑ باشد دارای اثر آنتاگونیسم می باشد. نتایج: از بین 80 ایزوله ای که مشکوک به رودوتورولا بودند، فقط یک ایزوله برای تولید بیوسورفکتانت استفاده شد. طبق تست های تاییدی مختلف که انجام شد، این ایزوله دارای بیشترین قدرت تولید بیوسورفکتانت می باشد. ایزوله موردنظر مورد آنالیز مولکولی قرار گرفت و گونه رودوتورولا پالودیجنا تایید شد. نتایج ما نشان داد که بیوسورفکتانت خام تولیدی توسط رودوتورولا پالودیجنا دارای اثر ضد کاندیدایی در دامنه 8-5/0 میلی گرم بر میلی لیتر می باشد. در مطالعه حاضراثر سینرژیسمی در ترکیب داروی کاسپوفانژین و بیوسورفکتانت مشاهده شد. استفاده همزمان آمفوتریسین ب، تربینافین، ایتراکونازول و وریکونازول با بیوسورفکتانت بدون اثر می باشد. همچنین داروهای پوساکونازول، میکونازول، فلوکونازول در ترکیب با بیوسورفکتانت دارای اثر انتاگونیسم می باشند. نتیجه گیری: نتیجه گیری می شود که رودوتورولا پالودیجنا یک پتانسیل خوب برای تولید بیوسورفکتانت می باشد. علاوه بر آن بیوسورفکتانت تولیدی علیه ایزوله های مختلف کاندیدا آلبیکنس در invitro موثر می باشد. از سوی دیگر در ترکیب همزمان کاسپوفانژین و بیوسورفکتانت علیه کاندیدا آلبیکنس اثر سینرژیسم مشاهده شد. Introduction: Biosurfactants are natural extracellular microorganism products that are developed during recent years for industrials, medicinal, environmental and several other uses. Environmentally friendly (biodegradability and low toxicity) is one of the most important characteristic that noted by several researchers. Althought, the majority of microbial biosurfactants originated from bacteria, some studies have shown that Rhodotorula muciliginosa and Candida rugosa are new sources for the production of biosurfactants. Aims: In the present study we evaluated the combination effect of biosurfactant produced by Rhodotorula and several antifungal drugs (amphotericine B, fluconazole, caspofungin, itraconazole, miconazole, voriconazole, posaconazole and terbinafine) against several isolates of C. albicans recovered from different sources. Materials and Methods: In the present study R. paludigena were subjected for the production of biosurfactanat and yielded product was confirmed using several tests such as, oil displacement, drop collapse and hemolysis tests. Biosurfactant was produced using Sabouraud dextrose broth for 5-7 days. Free cells supernatants were collected by centrifugation and extracted using a mixture of chloroform and methanol. Crude biosurfactant was kept at 4ºC overnight and then removed residue chloroform and methanol. Dried biosurfactant kept at -20ºC until use. A serial dilution of biosurfactant and tested antifungals were prepared in RPMI 1640 containing 0.01% Resazurin. Checkerboard method was used for combination antifungal assessment. Fractional inhibitory concentration (FIC) was calculated for each tested yeast as follows; ΣFIC = FICA )MIC of drug A in combination/the MIC of drug A alone) + FICB (MIC of drug B in combination/the MIC of drug B alone). ΣFIC values were interpreted as, ≤0.5, synergistic; >0.5 to 1, additive, 1 to <4.0, indifference; and ≥4.0, antagonistic. Results: Out of 80 suspected isolates to Rhodotorula, only one isolate used for the production of biosurfactant. According to different confirmatory tests, this isolate was powerful for biosurfactant producing. Isolate was subjected for sequencing analysis and R. paludigena confirmed. Our results shows that crude biosurfactant produced by R. paludigena has anti-Candida effect at the range of 8-0.5 mg/ml. In the present study, synergism effect (ΣFIC values ≤0.5) was found when the combination of biosurfactant and caspofungin applied against tested isolates. On the other hand, the combination of each voriconazole, itraconazole, terbinafine and amphotericin B had indifference effect (ΣFIC values 1 to <4.0). Posaconazole, miconazole and fluconazole had antagonistic effect (ΣFIC values ≥4.0) in combine with biosurfactant. Conclusion: It is concluded that R. paludigena has a good potential for the production of biosurfactant. In addition, producing biosurfactant is effective against different isolates of C. albicans in vitro. On the other hand, the synergism effect was found when both biosurfactant and caspofungin applied against C. albicans.

Item Type: Thesis (Masters)
Keywords: بیوسورفکتانت، کاندیدا آلبیکنس، داروهای ضد قارچی، درمان های ترکیبی Biosurfactant, Candida albicans, Antifungal drugs, Combination therapy
Subjects: Q Science > QR Microbiology
Divisions: Faculty of Medicine, Health and Life Sciences > School of Medicine
Depositing User: آقای بهرام سوسنی غریب وند
Date Deposited: 29 Mar 2017 06:33
Last Modified: 29 Mar 2017 06:33
URI: http://eprints.ajums.ac.ir/id/eprint/3781

Actions (login required)

View Item View Item