Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences

بررسی مولکولی گونه های میکروسپویدیا با استفاده از ژن rRNA – (SSU) در گاوهای کشتار شده استان خوزستان Molecular study on Microsporidia strians using (SSU)- rRNA gene in slaughtered cattles in Khuzestan province

کرد سرکچی, الهام (2015) بررسی مولکولی گونه های میکروسپویدیا با استفاده از ژن rRNA – (SSU) در گاوهای کشتار شده استان خوزستان Molecular study on Microsporidia strians using (SSU)- rRNA gene in slaughtered cattles in Khuzestan province. Masters thesis, دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran,School of Medicine دانشکده پزشکی

[img]
Preview
Text
m112079.pdf.pdf

Download (939kB) | Preview

Abstract

مقدمه: با توجه به اهمیت زئونوتیک میکروسپوریدیا و توانایی آن جهت انتقال از حیوانات به انسان ، همچنین افزایش روز افزون بیماران مبتلا به ایدز و سایر بیماریهای نقص سیستم ایمنی و شیوع عفونتهای انگلی نو پدید و باز پدید، اهمیت تک یاخته مورد نظر بارز می گردد. هدف از این مطالعه به دست آوردن میزان فراوانی و بررسی مولکولی جهت تعیین گونه و شناسایی ژنوتایپ میکروسپوریدیای آلوده کننده در گاوهای استان خوزستان با استفاده از ژن SSUrRNA می باشد. روش کار: در بررسی اخیر که از خرداد 92 تا پایان شهریور 93 ادامه داشت، مجموعاً تعداد 256 نمونه مدفوع از گاوهای 5 منطقه استان خوزستان (شمال، جنوب، شرق و غرب و مرکز) جمع آوری و پس ازصاف و تغلیظ کردن، اسمیر تهیه کرده و با رنگ آمیزی تریکروم اصلاح شده (وبر) رنگ آمیزی شد و زیر میکروسکوپ نوری جهت دیدن اسپور انگل مشاهده گردید. سپس به کمک کیت استخراج DNA مخصوص مدفوع (Bioneer)، DNA نمونه ها استخراج و جهت شناسایی و بررسی های مولکولی در 20- درجه سانتی گراد نگهداری شدند. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی 4 گونه اصلی آلوده کننده انسان ، به کمک تکنیک های Multiplex/nested PCR نمونه ها آزمایش گردید. با استفاده از آغازگرها قطعات حدود 508-305 جفت بازي براي دو جنس انتروسايتوزون و انسفاليتوزون تكثير یافته است. نمونه هایی که به وسیله پرایمر های اولیه مثبت شدند توسط پرایمر های ثانویه وروش مولكولي Multiplex/nested PCR و به ترتیب برای افتراق گونه انتروسیتوزون بینوئوسی از گونه های انسفالیتوزون استفاده گردید. پس از به دست آوردن محصول Nested PCR، جهت تایید نمونه های مثبت به روش PCR هضم آنزیمی (RFLP) به کمک آنزیم محدود الاثر mnl1انجام گرفت. جهت تعیین ژنوتایپ، نمونه های مثبت در هضم آنزیمی، Sequncing شدند. نتایج با استفاده ازنرم افزار SPSS17 و با روش آماری کای اسکور مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج : از بین 256 نمونه مدفوع جمع آوری شده، به کمک روش رنگ آمیزی 21 نمونه مثبت و به کمک روش Nested PCR تعداد 48 نمونه مثبت تشخیص داده شد. 36 ایزوله انتروسیتوزون بینئوسی به ترتیب فراوانی ژنوتایپ D(22)، J (9) و M (5) شناسایی گردید. 9 گونه انسفالیتوزون (Encephalitozoon) که شامل 2 مورد کانیکولی (Cuniculi)، 6 مورد اینتستینالیس (Intestinalis) و 1 مورد هلم (Hellem) و در نهایت 3 نمونه میکس (از هر دو گونه انسفالیتوزون و انتروسیتوزون) شناسایی شد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که گاوها می توانند به عنوان منبع عفونت میکروسپوریدیا باشند. این بررسی از نظر بهداشتی حائز اهمیت بوده و با توجه به زئونوتیک بودن انگل، گاو می تواند به عنوان یک منبع مهم انتقال دهنده عفونت به انسان مطرح باشد. بیشترین خطر آلودگی برای کسانی می باشد که سیستم ایمنی آنها تضعیف شده باشد. Taking into account the zoonotic importance of Microsporidia and its transfer from animals to human on one hand and the increasing number of pations of AIDS and other similar Immune deficiency diseasesand The prevalence of emerging and re-emerging parasitic infections on the other hand, emphasizes the importance of studying of the protozoa. The current study aims at investigating the prevalence and abundance as well as molecular study for identification of species and genotype of Microsporidia infecting cow using gen SSUrRNA, in Khuzestan province. METHOD A total number of 256 sample of cattle manure were collected from 5 regions in Khuzestan Province (north, south, west، center and east) and after filtration and concentration, smears were derived and were painted using specific painting and they were observed by light microscope to observe parasitic spores. Later samples’ DNAs were extracted using DNA extractor kit for manures (BIONEER) and were kept in -20 degrees for identification and molecular study. Samples were tested using Multiplex/Nested PCR techniques, using 4 major types of human infector primers. Using the Primers, pieces around 508 –305 pairs of Enterocytozoon and Encephalitozoon were proliferated which were positive samples of primers and were used by second primers and method of Multiplex/Nested PCR and was used For the purpose of segregating the specie of Enterocytozoon bineusi, from Encephalitozoon spp . After gaining the result of Nested PCR, enzyme digestion was carried out using MNl1. In order to identify genotype, the genotype of species was identified by sequencing technique. The results were analyzed using SPSS17 software and the Chi-square statistical test. RESULT From 256 collected samples of cattle manure 21 positive samples were obtained from the method of painting and 48 positive samples were obtained from the method of PCR. 36 species of Enterocytozoon bineusi with D, M and J genotypes were identified, respectively. 9 species of Enterocytozoon including 2 cases of cuniculli, 6 cases of Intestinalis and one case of Hellem and finally 3 mixed samples were identified. The results further showed that cows can be the source of Microsporidia infection. The present study is hygienically significant and taking into account the zoonotic of parasite, cows can transfer and infect human, specifically those who have a deficient immune system.

Item Type: Thesis (Masters)
Keywords: انتروسیتوزون، انسفالیتوزون، ژنوتایپ، گاو، استان خوزستان، میکروسپوریدیا Enterocytozoon, Encephalitozoon, genotype, cow , khuzestan , microsporidian
Subjects: Q Science > QR Microbiology
Divisions: Faculty of Medicine, Health and Life Sciences > School of Medicine
Depositing User: آقای بهرام سوسنی غریب وند
Date Deposited: 03 Apr 2017 11:53
Last Modified: 03 Apr 2017 11:53
URI: http://eprints.ajums.ac.ir/id/eprint/3868

Actions (login required)

View Item View Item