Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences

ارزیابی بلوغ سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی بیضه منجمد - ذوب شده در محیط انجمادی دارای ملاتونین بعد از پیوند به بیضه موش سوری آزواسپرمی شده Assessment of Cryopreserved-Thawed Testis Spermatogonial Stem Cells Maturation in Melatonin supplemented Medium after Transplantation into Azospermia Mouse Testis

غلامی, محمدرضا (2012) ارزیابی بلوغ سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی بیضه منجمد - ذوب شده در محیط انجمادی دارای ملاتونین بعد از پیوند به بیضه موش سوری آزواسپرمی شده Assessment of Cryopreserved-Thawed Testis Spermatogonial Stem Cells Maturation in Melatonin supplemented Medium after Transplantation into Azospermia Mouse Testis. Doctoral thesis, دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی جندی شاپور اهواز,School of Medicine دانشکده پزشکی

[img]
Preview
Text
m47521.pdf.pdf

Download (1MB) | Preview

Abstract

مقدمه: امروزه نگرانی برگشت باروری به عنوان اصلی ترین مشکل بعد از درمان سرطان مطرح است. برای بچه های قبل از سن بلوغ( و شاید بعضی مردان)، انجماد سلول های بنیادی اسپرماتوگونی پیش از درمان و دوباره بازگرداندن این سلول ها به بیضه بمحض خاتمه درمان یکی از روش هایی است که ممکن است بصورت دائمی قابلیت باروری طبیعی را بدنبال درمان بیماری های مشروحه به بیمار برگرداند. ملاتونین از غده پینه آل و بعضی از ارگان های بدن مانند بیضه ترشح می شود و دارای خواص آنتی اکسیدانی، آنتی آپوپتوزی و... می باشد که ممکن در ارتقاء کیفیت پیوند مهم باشد. مواد و روش کار: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی موش 6 روزه پس ازاستخراج و جداسازی به دو گروه تقسیم شدند. گروه یک: این سلول ها در محیط انجماد-ذوب دارای ملاتونین انجماد-ذوب شدند. گروه دوم: بعنوان گروه کنترل در محیط انجماد-ذوب فاقد ملاتونین انجماد-ذوب شدند. پس از ذوب کیفیت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی با استفاده فلوسایتومتری(بررسی آپوپتوز)، تست سمیت و بیان ژنهای آپوپتوزی مورد بررسی قرار گرفتند. سپس این سلول ها به بیضه موش آزواسپرم شده (mg/kg 40 بوسولفان) پیوند شدند. سلول های اسپرماتوگونی قبل از پیوند با کیت فلوروسنس PKH26 نشاندار شدند. بعد از گذشت دو ماه، موش ها را کشته و بمنظور بررسی کارایی پیوند و تداوم اسپرماتوژنز توسط سلول های اسپرماتوگونی پیوند شده از تکنیک ایمونوفلورسنس برای ردیابی پروتئین هسته ای TNP-2، رنگ آمیزی بافتی H&E و تکنیک تانل بافتی برای ردیابی آپوپتوز استفاده گردید. نتایج: در مقایسه درصد سلول های زنده، آپوپتوز و نکروز در گروه یک و دو، تفاوت معنی داری از لحاظ آماری مشاهده شد (P=0.008). افزودن ملاتونین باعث القاء روند آپوپتوز و افزایش بیان ژن های آپوپتوزی مانند FAS, Bax, Bcl-2 وp53 می شود. تزریقmg/kg 20 ملاتونین بعد از پیوند سلول های بنیادی باعث افزایش کارائی پیوند می شود و خصوصیات ساختاری بافت را بهبود و روند اسپرماتوژنز را پیش می برد. نتیجه گیری: افزودن ملاتونین به محیط انجماد-ذوب سوسپانسیون سلولی بیضه، سلول های آسیب دیده را به سمت آپوپتوز سوق می دهد. احتمالا˝ تولید ROS، سلول را از طریق مسیرهای آپوپتوزی داخلی(میتوکندری) و خارجی(غشائی) بسمت آپوپتوز و بیان ژن های آپوپتوزی مانند FAS, Bax, Bcl-2 وp53 سوق می دهد. تجویز ملاتونین همزمان با پیوند سلول بنیادی اسپرماتوگونی به بیضه موش، موجب بهبود کیفیت اسپرماتوژنز می گردد. Introduction: Today, as a major concern to fertility problems has been after cancer treatment. Cryopreservation of spermatogonia stem cells to treat children with cancer is one of the ways to preserve their fertility. Restore spermatogonia stem cells to the testes after treatment is one of the methods that may be returned the patient permanent natural fertility after cancer treatment. Melatonin is secreted from the pineal gland and some organs like the testes. Melatonin has antioxidant properties, anti-apoptosis. Melatonin might be important in improving quality of cell transplantation. Materials and Methods: Spermatogonia stem cells of mice 6-old- days after the extraction and separation were divided into two groups. Group one: vitrifying-thawing in the medium contain melatonin. Group two: vitrifying-thawing in the medium without melatonin. The quality of spermatogonia stem cells were examined using flow cytometric (Apoptosis), cytotoxicity testing, and expression of apoptosis genes after digestion .Then these cells were transplanted into the testes of infertile mice (mg / kg 40 busulfan). Spermatogonia cells before transplantation were labeled with PKH26 Fluorescent kit. The mice died two months after transplantation and efficiency of spermatogenesis was investigated. TNP-2, H & E and TUNEL was used to detect efficiency of cell transplantation. Results: In comparing the percentage of living cells, apoptosis and necrosis in group one and two, the difference was statistically significant (P = 0.008).supplementation media with melatonin induced apoptosis and increased expression of apoptotic genes such as FAS, Bax, Bcl-2 and p53. Injection 20 mg / kg melatonin intraperitoneal after stem cell transplantation increases the efficiency of transplantation and will improve structural properties of the testes tissue. Conclusion: supplementation freezing - thawing media with melatonin promotes damaged cells toward apoptosis. Melatonin increased expression of apoptotic genes such as FAS, Bax, Bcl-2 and p53 and induced production of ROS that lead to cell apoptosis through the internal pathways (mitochondria) and external (membrane). Administration of Melatonin simultaneously with transplantation of spermatogonia stem cell into Azospermic mouse testis is improved spermatogenesis quality.

Item Type: Thesis (Doctoral)
Keywords: ملاتونین، پیوند، اسپرماتوگونی، انجماد Melatonin, Transplantation, Spermatogonia, Cryopreservation
Subjects: R Medicine > R Medicine (General)
Divisions: Faculty of Medicine, Health and Life Sciences > School of Medicine
Depositing User: آقای بهرام سوسنی غریب وند
Date Deposited: 17 Apr 2017 07:16
Last Modified: 17 Apr 2017 07:16
URI: http://eprints.ajums.ac.ir/id/eprint/4928

Actions (login required)

View Item View Item