Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences

بررسی سرو اپید میولوژی ویروس انفولانزا نوع‭AIH And N‬ به روشهای ممانعت از هماگلوتیناسیون و الیزا در کارکنان کشتارگاههای طیور ومرغداری شهرستان اهواز در سال‭۱۳۸۲ ‬ بررسی سرو اپید میولوژی ویروس انفولانزا نوع‭AIH And N‬ به روشهای ممانعت از هماگلوتیناسیون و الیزا در کارکنان کشتارگاههای طیور ومرغداری شهرستان اهواز در سال‭۱۳۸۲ ‬

فتاحی عبدی زاده, مجتبی (2010) بررسی سرو اپید میولوژی ویروس انفولانزا نوع‭AIH And N‬ به روشهای ممانعت از هماگلوتیناسیون و الیزا در کارکنان کشتارگاههای طیور ومرغداری شهرستان اهواز در سال‭۱۳۸۲ ‬ بررسی سرو اپید میولوژی ویروس انفولانزا نوع‭AIH And N‬ به روشهای ممانعت از هماگلوتیناسیون و الیزا در کارکنان کشتارگاههای طیور ومرغداری شهرستان اهواز در سال‭۱۳۸۲ ‬. Masters thesis, دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran,School of Medicine دانشکده پزشکی

[img]
Preview
Text
m74069.pdf

Download (14MB) | Preview

Abstract

ویروس لوسمی سلولهای T انسانی نوع 1 (HTLV-1) اولین رتروویروس سرطانزای انسانی، عامل دوناخوشی پیشرونده ی مهم، لوسمی سلول T بزرگسالان (ATL) ومیلوپاتی وابسته به HTLV-1 /پاراپارزی اسپاستیک تروپیکال(HAM/TSP) می باشد. این ویروس یک مشکل مهم برای سلامت جامعه بویژه در مناطقی از ایران از جمله خراسان می باشد که در بعضی مناطق تا3% افراد به آن آلوده هستند. پس از سه دهه از کشف این ویروس درمان بیماریهای وابسته به آن نا امید کننده بوده وداروی تایید شده برای این بیماران وجود ندارد. تعیین و مانیتورینگ کمی آلودگی ویروس برای تحلیل حساسیت دارویی و بررسی مراحل تکثیر ویروس حیاتی است. دراین خصوص روشهای متداول برای ویروس HIV از جمله End-point dilution و plaque assays برای ویروس HTLV-1، به لحاظ خصوصیات رشدی منحصر به فرد آن وجود ندا شته و بررسی ویروس محدود به روشهای پر هزینه از جمله ELISA و Real-time PCR می باشد. بنابراین راه اندازی یک سیستم بیولوژیکی به منظور مانیتورینگ آلودگی ویروس HTLV-1 بر اساس ژن ریپورتر برای مطالعات پایه ی وکلینیکی بویژه کشف دارو ضروری است. سیستمهای ریپورتربخاطر پایداری حساسیت آنها به ویروس و همچنین تکرار پذیری و سرعت بازده آن، نسبت به سلولهای خون محیطی ترجیح داده می شود. سیستمهای زیادی بخصوص برای رتروویروسها گزارش شده است که غالبا بر اساس ترانس اکتیواتوری پروموترویروس(LTR ) می باشند. در این طرح تلاش شد تا یک رده سلول نشانگر برای ویروس HTLV-1 شامل دو ژن ریپورتر همزمان برای ردیابی ویروس و بررسی حیات سلول ساخته شود. بدین منظور پروموترویروس(LTR )HTLV-1 مشتمل بر سه ناحیه پاسخ به پروتئین Tax از وکتور pUCLTR-LacZ-PolyA بریده و در وکتور بدون پروموتر pGL4.17 در بالا دست ژن لوسیفراز ساب کلون شد تا وکتورریپورترpGL4LTR-Luc ساخته شود. وکتورریپورتر دوم( pCDNA3.1+Hyg SV40-EGFP) با کلون کردن محصول Soeing PCR یعنی قطعه(SV40-EGFP) در وکتور pCDNA3.1+Hyg ساخته شد. در صورت انتقال پایداروکتور دوم به سلول یوکاریوتی، پروتئینEGFP بطوردائم بیان می شود. پس از ارزیابی وکتور ها، ساخت رده سلولی نشانگرBHK-EGFP-HTLVLTR-Luc، با انتقال هردو وکتورذکر شده بطور پایداربه سلول BHK-21 انجام گرفت. سپس حساسیت و اختصاصیت سلول ساخته شده در برابر ویروس با استفاده از سلولهای تولید کننده ویروسMT2 و Hut-102و نیز سلول کنترل منفی Jurkat تایید شد. در نهایت اثر داروی ارسنیک، اسید اسکوربیک و اینترفرون آلفا بر روی سلول آلوده به ویروس، با استفاده از سلول نشانگرسنجیده واین روش با روشهای ELISA و Real-timeRT- PCR مقایسه و ارزیابی شد. The human T-cell leukemia virus type 1 (HTLV-1) , first human oncogenic retrovirus, is causatively associated with two important progressive disorders, adult T-cell leukemia (ATL) and HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). It is a real health problem in certain region of Iran such as Khorasan where up to 3% of general population are infected by this virus in some region. Over three decades after the discovery of the virus, treatment of associated diseases are disappointing and there is no approved drug for these patients. The determination and quantitative monitoring of virus infectivity is crucial for the analysis of drug susceptibility and various steps of the virus replication cycle studies. In this regard traditional methods such as End-point dilution and plaque assays for determination of virus titer are not available due to difficult growth properties of HTLV-1 in contrast to that of HIV-1, for which various useful assay systems are available and evaluating confined to expensive methods such as ELISA and Real-time PCR. Therefore development of a measurable biological system based on reporter gene in order to monitor HTLV-1 infectivity is prerequisite for various basic and clinical studies especially drug discovery. Reporter systems are preferred because their susceptibility to virus is stable and their output is both rapidly measurable and highly reproducible compared to that of PBMC assays.Many systems reported mainly for retroviruses, have had a similar strategy and carrying a reporter gene also based on LTR Promoter. Efforts in this project were to construct an HTLV-1 indicator cell line containing two reporter genes in order to monitor virus infectivity and cell viability Simultaneously. HTLV-1 LTR promoter containing three Tax respond elements (TRE I, II and III) from pUCLTR-lacZ was digested and subcloned into the promoterless vector, pGL4.17, upstream to Luciferase reporter gene, to generate pGL4LTR-Luc vector. Second reporter vector, pCDNA3.1+Hyg SV40-EGFP, was constructed by cloning of Soeing PCR product (SV40-EGFP) into pCDNA3.1+Hyg plasmid to express EGFP continuously when introduce into a mammalian cell. In order to making HTLV-1 indicator cell line with two reporter genes , named as BHK-EGFP-HTLVLTR-Luc, BHK-21 cell was stably transfected by both aforesaid reporter vectors.Then specificity and sensitivity of indicator cell was evaluated using HTLV-1producing cell linesMT2 and Hut-102 cells and non producing Jurkat cell line. After all the effect of drugmix containing Arsenic, Ascorbic acid and Interferon on HTLV-1 infected cells was assayed by indicator cell line compare to ELISA and Real-timeRT- PCR.

Item Type: Thesis (Masters)
Keywords: ریپورتر وکتور لوسیفراز HTLV-1 luciferasce reporter vector
Subjects: Q Science > QR Microbiology > QR355 Virology
Divisions: Faculty of Medicine, Health and Life Sciences > School of Medicine
Depositing User: آقای بهرام سوسنی غریب وند
Date Deposited: 22 Apr 2017 06:54
Last Modified: 22 Apr 2017 06:54
URI: http://eprints.ajums.ac.ir/id/eprint/5260

Actions (login required)

View Item View Item